ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ГЕРОНТОЛОГИЯ

ДИАГНОСТИКА СТАРЕНИЯ:

ИЗМЕНЕНИЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ С ВОЗРАСТОМ У МЫШЕЙ

М.А.Гаврилов, М.В.Глушков, В.И.Донцов В.Е. Чернилевский

Исследование десятков параметров, отражающих об­щее состояние животных и различные стороны процесса старения, указывают, что лишь немногие тесты могут быть использованы для рутинных исследований, так как боль­шинство тестов имеют значительные индивидуальные различия или мало отличаются для молодых и старых.

Наиболее значимыми биомаркерами старения являют­ся: показатели физической силы, основного обмена, тесты отражающие старение иммунной системы, потенциал тка­ни (гиперплазия слюнных желез на изопротеренол).

ВСТУПЛЕНИЕ

Несмотря на большое число предложенных методов оценки старения у экспериментальных животных, остается неясным на­сколько они отражают процесс старения и насколько они эффек­тивны в его оценке. Мы исследовали панель методов оценки раз­личных сторон старения у мышей, с целью отбора наиболее ин­формативных, с наименьшим индивидуальным разбросом и наи­большими изменениями с возрастом методик, которые могли бы быть полезны для быстрой оценки влияния на процесс старения различных геропрофилактических и биоактивирутощих средств.

В работе использовали 15 молодых и 15 старых мышей долгоживущей линии - линии Ва1Ь/с, самок, полученных из питомника «Столбовая», содержащихся на стандартном корме в виварии от момента поступления, в возрасте 3 мес и 12 мес.

Для комплексной оценки старения животных использовали панель тестов, которые в предварительных экспериментах пока­зали значительные различия для молодых и старых животных, и, в то же время, малые индивидуальные отклонения, а также такие часто применяемые показатели, как подвижность по числу пере­сеченных квадратов, или число стоек (ориентировочный реф­лекс), Параллельно для групп контрольных и опытных мышей исследовали следующие показатели.

52


МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Общие физиологические показатели:

-  общий вид по 6 показателям в баллах: блеск, цвет и лоск
шерсти, наличие старческого горба и блеск глаз - по 4-бальной
шкале (4 балла - норма у молодых), рост (с точностью 1 мм), вес
тела (с точность 0,1 г).

-  физическая сила: время в сек. висения на струне, натянутой
на высоте 80 см и максимальная сила натяжения динамометра
(точность 0,1 г).

Общая реактивность:

-  уровень потребления кислорода оказался весьма лабиль­
ным индивидуальным показателем, связанным с подвижностью
животных;

температура тела отражает интенсивность общего обмена,
и с возрастом у мышей она снижается на 1,5-2°С и более. Температуру тела оценивали в прямой кишке медицинской термопарой,на глубине 1 см (точность 0,1 °С).

Морфологические показатели:

- вес внутренних органов (абсолютный и относительный к
массе тела) исследовался для оценки возрастной атрофии тканей.

Состояние иммунной системы:

-  исследовали относительный вес органов иммунитета (тимуса и селезенки);

-  количество активных - бластных клеток в селезенке, неосаждающихся при центрифугировании в градиенте плотности фиколла 1,065;

-  количество циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК)
сыворотки крови методом осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ-
6000) с нефелометрической регистрацией степени помутнения на
спектрофотометре, выражая результаты в у.е. равных оптической
плотности. Для определения ЦИК к 0,05 мл сыворотки крови
мышей добавляли 0,1 мл 0,1 М боратный буфер с рН 8,4. и 1 мл
ПЭГ, через 1 час при 20°С замеряли оптическую плотность при
450 нм.

Потенциал клеточного роста:

оценивали на примере реакции Селье — фармакологически индуцированной гиперплазии слюнных желез; реакция резко снижается с возрастом и зависит от определенных популяций Т-лимфоцитов, регулирующих клеточный рост соматических кле­ток [4-7].

53

Оценка возрастного остеопороза в эксперименте

Использовали разработанную ранее методику оценки прочно­сти кости у животных в остром опыте по диаметру кости и силе перелома (при постоянном плече перелома): 8 = Р / В3, согласно представлениям науки о сопротивлении материалов [1].

Альтернативными единицами могут служить: относительная масса кости к массе тела и отношение критической силы «Р» к массе тела, а также относительное содержания кальция к мас­се кости, отражающее степень минерализации кости.

Результаты подвергали статистической обработке с вычисле­нием: среднего (М), среднеквадратичного отклонения (т), мак­симального и минимального абсолютных значений, коэффициен­та Стьюдента для сравнения значений у молодых и старых жи­вотных и достоверности (р).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты исследований отражены на таблице 1. Здесь ука­заны средние значения параметров, средне-квадратичные откло­нения, максимальные и минимальные значения параметров в группах молодых (3 мес) и старых (12 мес) животных.

Оценка общего вида животных по блеску, цвету и лоску шерсти, наличию старческого горба и блеску глаз в баллах не бы­ла информативная, так как старые животные выглядели не на­много хуже молодых 3-х - ,4-х месячных. Мы наблюдали резкие изменения внешнего вида лишь в гораздо более поздних возрас­тах и при кормлении животных преимущественно гранулирован­ным кормом, добавки же, как в нашем случае, овощей, молока, круп и не ограниченное питание предотвращали резкие внешние изменения у мышей в наших наблюдениях.

Рост грызунов продолжается в течение всей жизни, однако. со временем он резко замедляется.

Вес в наших условиях, когда животные получали неограни­ченное и разнообразное питание, четко показал разделение мы­шей на 2 группе - с массой тела 24-27 гр. и 33-40 тр., с явными признаками ожирения во втором случае.

Общая активность по числу стоек и количеству пересечен­ных квадратов за определенное время также не различалась для молодых и старых мышей и индивидуально значительно варьировала.


Мало значимым был также тест гемолиза эритроцитов кро­ви. Действительно, ряд авторов противоречат друг другу даже в направлении изменения этого теста с возрастом. Возможно, здесь следует использовать специальные методы и узкие границы теста

Весьма значимыми являются изменения ростового потен­циала ткани с возрастом. Тесты с индукцией гипертрофии ткани (репаративная регенерация) и их значительное изменение с воз­растом широко известны. Увеличиваются время начала и макси­мума достижения митозов, масса регенерации и др. показатели. Такие тонкие тесты, как скорость движения пульсовой радиоак­тивной метки, отражающие скорость самообновления ткани, по­казывают, например, что скорость самообновления печени сни­жается с возрастом в сотни раз(!). Нами использовался тест Селье

-  феномен гиперплазии ткани слюнных желез [4-7] при введении
симпатомиметиков   (бэта-адреномиметика   изопротеренола).   У старых животных зачастую гиперплазия отсутствовала, как и наблюдаемая параллельно властная реакция активации лимфоцитоврегинальных лимфоузлов и селезенки. Как отмечалось выше, этоуказывает  на  снижение   лимфоидного   обеспечения   ростовых функций соматических тканей в рамках развиваемой нами иммунной теории старения.

Обычным явлением у старых животных и человека является остеопороз. Оценка его у мышей, однако, является отдельной специальной задачей [2, 3, 8-12]. Как видно из выше приведенной таблицы, сравнение костной ткани старых и молодых мышей дает значимые отличия для относительного содержания кальция на массу сухой кости и прочности кости - отношения силы ломки кости к кубу диаметра кости.

Ниже представлены индивидуальные разбросы полученных данных, позволяющие отметить значительные индивидуальные различия для всех используемых тестов.

На последних двух рисунках представлены данные о наубха-нии участка хвоста мышей в концентрированной серной кислоте

-  известный тест на состояние соединительной ткани. В зависи­
мости от плотности и лабильных составляющих, способность
удерживать воду и концентрированные кислоты изменяется, что
отражает, по существу, процесс возрастного фиброза соедини­
тельной ткани, носящий генерализованный характер.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследование несколько десятков параметров, отражающих общее состояние животных и различные стороны процесса ста­рения, указывают, что лишь немногие тесты могут быть исполь­зованы для рутинных исследований в целях скрининга средств геропрофилактики и биоактивации, так как большинство тестов имеют значительные индивидуальные различия или мало отли­чаются для молодых и старых животных.

Наиболее значимыми являются: показатели физической силы, основного обмена, показатели, отражающие старение иммунной системы, ростовой потенциал ткани на основе определения реак­ции гиперплазии слюнных желез на изопротеренол.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Беляев Н.М.Сопротивление материалов.М.:Наука. 1976.608 с.

2. Бутенко Г.М. Проблемы остеологии. 1999.Том 2.№З.С.23-28.

3. Воложин  А.И.   Остеопороз.   М.:   Практическая  медицина.
2005. С. 23.

4. Донцов В.И. Ретуляция лимфоцитами клеточной пролифера­
ции - альтернатива теории "противоопухолевого надзора"?

// Иммунология. 1989. N. 5. С. 94-96.

5. Донцов В.И. Иммунобиология постнатального развития. М.
:РАН, МОИП. :Наука. 1990. 152 с.

  1. Донцов В.И., Крутько В.Н. Подколзин А.А. Фундаменталь­
    ные механизмы геропрофилактики.  М.:  Биоинформсервис.
    2002.464с.
  2. Донцов В.И., Крутько В.Н., Труханов А.И. Анти-возрастная
    медицина. М.:1Ж88. 2010. 680 с.

8. Устимеико А.Н., Пашинян Л.Н., Родниченко А.Е., Бутенко
Г.М. //Досягнення бюлогп та медицини. 2005; Т. 6. №2 С.45.

9. Висау К., 8аго81 !., Виш1ап С.К. е1 а!.//0епез осу. 1998. Уо1.
12. Р.1260.

10.     Оеойгоу V., Кяеизе! М., Роигшег В., е1 а!.// Мо1. а11. Вю1.
2002. Уо1.22. N 17. Р.6222.

11.  Огсеу.с I)., Ка1ау1с V., Ьик^с I. е! а1. //Сгоапап Месйса! )огпа1.
2001.Уо1.42.К4.Р.384.

12.     Кхззеп-Меуег Ь.5., ТетИапо1 К., СаиЫк У.Т., е! а!.//1. Се11.
5с1. 2007. Уо1.120. N 16. Р.2785.


ДИАГНОСТИКА СТАРЕНИЯ:

ИЗМЕНЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЬГС ВОЗРАСТОМ У МЫШЕЙ

В.Е. Чернилевский, В.И.Донцов, МЛ.Гаврилов

Исследование десятков параметров, отражающих об­щее состояние животных и различные стороны процесса старения, указывают, что лишь немногие тесты могут быть использованы для рутинных исследований, так как боль­шинство тестов имеют значительные индивидуальные различия или мало отличаются для молодых и старых.

Наиболее значимыми биомаркерами старения из био­химических показателей являются ТБК-активные вещест­ва.

ВВЕДЕНИЕ

Несмотря на большое число предложенных методов оценки старения у экспериментальных животных, остается неясным на­сколько они отражают процесс старения и насколько они эффек­тивны в его оценке. Исследования биохимических параметров старения дают обычно противоречивые результаты. Наиболее интересны и закономерно изменяющиеся с возрастом являются параметры, отражающие состояние антиоксидантной системы, что коррелирует с представлениями о фундаментальных меха­низмах старения - повреждение клеток свободными радикалами (свободно-радикальная теория старения [5]).

Мы исследовали ряд показателей свободно-радикального ста­туса и антиоксидантной защиты у долгоживущих мышей в моло­дом и старом возрасте (3 и 12 мес), с целью отбора наиболее ин­формативных, с наименьшим индивидуальным разбросом и наи­большими изменениями с возрастом методик, которые могли бы быть полезны для быстрой оценки влияния на процесс старения различных геропрофилактических и биоактивирующих средств.

Для комплексной оценки старения животных использовали панель тестов, которые в предварительных экспериментах пока­зали значительные различия для молодых и старых животных, и, в то же время, малые индивидуальные отклонения, а также такие часто применяемые показатели,

Методы работы и полученные результаты показаны в ниже следующих таблицах и рисунках.

 

76


77


МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ                              /

В работе использовали 15 молодых и 15 старых' мышей дол-гоживущей линии с обычным течением старения - линии Ва1Ь/с, самок, полученных из питомника «Столбовая», содержащихся на стандартном корме в виварии от момента поступления, в возрасте 3 мес и 12 мес.

Состояние антиоксидантной системы:

Состояние антиоксидантной системы (АОС), отражает про­цессы повреждения тканей и составляет сущность свободноради-кальной теории старения; оценивались активность каталазы, пе-роксидазы, общее содержание продуктов свободнорадикального повреждения - ТБК-активных веществ, реагирующих с тиобар-битуровой кислотой, выражая результат в единицах оптической плотности.

Для определения ТБК-активных веществ 0,1 мл отмытых центрифугированием эритроцитов лизировали добавлением 1 мл дистиллированной воды, прибавляли 0,5 мл 17% трихлоруксус-ной кислоты для осаждения белка и кипятили 10 мин в кипящей бане; затем 10 мин центрифугировали при 3000 оборотов/мин и замеряли оптическую плотность при 540 нм на СФ-46.

Каталаза (по Королюк и др., 1988). Трижды отмытые эрит­роциты гемолизируют 1:500 и к 0,1 мл гемолизата добавляют 2 мл 0,03% перекиси водорода, через 10 мин. реакцию заканчивают добавлением 1 мл 4% молибдата аммония. Результат выражают в процентах распада перекиси [4].

Пероксидаза (по Асатиани В.С.). Трижды отмытые эритро­циты гемолизируют 1:100 и 0,2 мл гемолизата смешивают с 2 мл ацетатного буфера, 2 мл 2 N серной кислоты и 2 мл 0,3% переки­си водорода. Оценивают реакцию по времени в сек (в норме по­рядка 40 сек) в присутствии 1 мл 0,001 N (0,466%) индигокарми-на по изменению цвета - из синего через зеленый в нейтральный и слабо розовый. Ацетатный буфер (0,001 N с рН 4,7) готовят смешиванием равных объемов 0,2 N уксусной кислоты и 0,2 N ацетата натрия [1].

Глутатион (окисленный и восстановленный - ОГ и ВГ) опре­делялся нами в современном тесте с хлористым палладием.

Результаты подвергали статистической обработке с вычисле­нием: среднего (М), среднеквадратичного отклонения (т), мак­симального и минимального абсолютных значений, коэффициен­та Стьюдента для сравнения значений у молодых и старых жи­вотных и достоверности (р).

78


79

Антиоксидантная активность и свободные радикалы ти­пично изменяются с возрастом, как показано рядом авторов, од­нако, из всех используемых тестов значимо повышалось лишь количество ТБК-активных вещестов крови, которые законо­мерно повышались с возрастом и имели не слишком выраженные индивидуальные отклонения.

Показатели калатазы и пероксидазы не изменялись значимо с возрастом или нивелировались выраженными индивидуальны­ми разбросами.

Рис. 2. Возрастные изменения катадазы крови

Окисленный глутатион (ОГ) определялся нами в современ­ном тесте с хлористым палладием, который дает у авторов в не­сколько раз заниженные величины в сравнении с ранее опреде­ляемым тестом с орто-фталевьш альдегидом. Однако, более ран­ние данные по альдегидному тесту менее специфичны. Индиви­дуальные различия теста также велики (крайние значения нормы могут изменяться в разы), а определение ОГ часто ведется на уровне чувствительности метода.

При интерпретации данных по ОГ у старых животных следу­ет учитывать, что его значения могут быть быстро нормализова­ны введением ряда биоактивных добавок к пище, что вряд ли оз­начает быстрое и интенсивное «омоложение» животных.

80


81

82


Рис. 8. Связь максимальной продолжительности жизни и соотно­шения активность СОД / удельная продукция свободных радика­лов (интенсивность основного обмена - ИОО) (по данным лите­ратуры). Точки соответствуют в порядке повышения величин МПЖ видам: Домовая мышь, Оленья мышь, Тупайя, Беличья обе­зьяна, Галаго толстохвостый, Тамарин, Лемур, Зеленая мартыш­ка, Макака резус, Павиан анибус, Горилла, Шимпанзе, Человек.

83

Значимость исследованных параметров можно уяснить из общей схемы свободно-радикальных процессов (Рис. 7).

В целом, свободно-радикальная теория старения в настоящее время подверглась выраженным изменениям. К настоящему вре­мени ясно, что нет прямой связи между применением антиокси-дантнов (АО) и максимальной продолжительностью жизни (МПЖ). Видимо, АО полезны лишь в случае патологического подавления системы свободно-радикальной защиты организма, при повышенной активности или норме назначение АО даже снижает МПЖ [2, 3, 5].

В целом, связь МПЖ удается достаточно ясно связать только с комплексными показателями — соотношением удельной про­дукции свободных радикалов (которые пропорциональны интен­сивности основного обмена) и удельной активности супероксид-дисмутазы (СОД) - рисунок 8.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Исследование ряда параметров, отражающих состояние анти-оксидантной системы у мышей показало выраженные изменения для ТБК-активных веществ, при незначимых изменения других параметров, с высокой индивидуальной изменчивостью для ката-лазы и пероксидазы, а также глутатиона.

Наиболее значимыми для характеристики старения, таким об­разом, являются показатели содержания ТБК-активньгх веществ в крови, отражающие степень нерепарируемых повреждений тка­ни.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Асатиани В.С. Ферментативные методы анализа. М. :11аука.
    1969.612с.
  2. Донцов В.И., Крутько В.Н. Подколзин А.А. Фундаменталь­
    ные механизмы геропрофилактики. М.: Биоинформсервис. 2002.
    464с.
  3. Донцов В.И., Крутько В.Н., Труханов А.И. Анти-возрастная
    медицина. М. :(Ж88. 2010. 680 с.

 

  1. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токорева В.Е.
    Лаб. дело. 1988. №1. С. 16-19.
  2. Нагшап В. Аё1п§: оуетеж //Апп. N. V. Аса<1 8с1. 2001.
    Уо1.928. Р.1-21.Кеу{е\у.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ

ВОЗРАСТНОГО ОЖИРЕНИЯ У МЫШЕЙ

е*-*

МЛ.Гаврилов, И.В.Мальцева, В.Е. Чернилевский

Назначение старым мышам неограниченного питания с добавлением естественных натуральных продуктов позволя­ет достигать в эксперименте возрастного ожирения у поло­вины мышей. Отсутствие ожирения у второй половины мышей указывает на генетические влияния в поддержании массы тела, аппетита и особенностей метаболизма жира у линейных мышей.

ВВЕДЕНИЕ

Повсеместное распространение ожирения, в особенности яв­но выраженное возрастное ожирение у женщин, требует развития адекватных экспериментальных моделей возрастного ожирения у мышей, для целей выбора адекватных методов и препаратов про­филактики и лечения возрастного ожирения. Исследовали воз­можность достижения возрастного ожирения у мышей при неог­раниченном полноценном питании и эффект Трансфер фактора.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Использовали 15 долгоживущих линейных мышей (ВАЬВ/с, самок), питомника «Столбовая», восьмимесячного возраста.

Свободный рацион, предоставленный подопытным мышам, позволил неограниченно питаться стандартным гранулирован­ным кормом с добавлением овощей, хлеба и молока.

Контролем служили мыши, содержащиеся на стандартном гранулированном корме вивария.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТА

Животные в ходе эксперимента четко разделились на 2 при­мерно равные группы - с ярко выраженным ожирением и без не­го (рис. 1). Контрольные животные, содержащиеся на гранулиро­ванном корме вивария, не проявляли признаков возрастного ожи­рения, обычным являлось появление возрастной дистрофии, воз­растного горба и других явных внешних проявлений старения, которые были сглажены у опытных мышей с неограниченным кормлением. Это означает создание экспериментальной модели возрастного ожирения, позволяющего в естественных для живот­ных условиях моделировать данный процесс.

 

84


85

Рис. 1. Развитие возрастного ожирения у мышей при неограни­ченном питании. По вертикали - масса мышей в граммах.

В то же время, у половины мышей, несмотря на доступность неограниченного питания, развития возрастного алиментарного ожиренил практически не происходит.

Отсутствие ожирения у второй половины мышей указывает, видимо, на генетические влияния в поддержании массы тела, ап­петита и особенностей метаболизма жира у линейных мышей.

Обращает также внимание, что применяемое неограниченное полноценное питание благотворно отражается на внешнем виде мышей, предотвращая и сглаживая внешние проявления старения - блеск и лоск шерсти, подвижность мышей, возрастной горб и пр.


Известно, что с возрастом происходят значительные измене­ния обмена веществ, а также развивается дистрофия паренхима­тозных тканей, котор1йе замещаются на соединительную ткань и на жировую ткань (при возрастном ожирении).

Согласно развиваемой нами иммунной теорий старения [ 2, 3] центральный механизм старения самообновляющихся тканей связан со снижением клеточного самообновления (снижением потенциала клеточного роста), что сопровождается снижением метаболизма клеток и изменением их жирового метаболизма в том числе. Возможность влияния на старение тканей посредством влияния на процесс клеточного роста связана с известной в оте­чественной геронтологии теорией регуляции процессов роста со­матических тканей Т-лимфоцитами, впервые апробированной на моделях травматической регенерации ряда органов [1],

Данная гипотеза и ее научная апробация позволяют в даль­нейшем использовать различные иммунотропные средства для омоложения тканей, а именно для восстановления клеточного потенциала роста тканей до уровня их высокого самообновления, как правило, резко уменьшающегося с возрастом.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработана модель возрастного ожирения у линейных мы­шей. Назначение старым мышам неограниченного питания с до­бавлением естественных натуральных продуктов позволяет дос­тигать в эксперименте возрастного ожирения у половины мышей. Отсутствие ожирения у второй половины мышей указывает, ви­димо, на генетические влияния в поддержании массы тела, аппе­тита и особенностей метаболизма жира у линейных мышей.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Бабаева А.Г. Прошлое, настоящее и будущее проблемы
    лимфоидной регуляции нелимфоидных клеток //Бюлл. экспер.
    биологии и мед. 1995. №9. С. 230-234.
  2. Донцов В.И. Иммунобиология постнатального развития. -
    М.: Наука. 1990. -152с.
  3. Донцов В.И., Крутько В.Н., В.Н. Подколзин А.А. Фунда­
    ментальные механизмы геропрофилактики. М.: Биоинформсер-
    вис. 2002. 464с.

 

86


87

ЭФФЕКТЫ «ТРАНСФЕР-ФАКТОРА»

В ПРОФИЛАКТИКЕ ВОЗРАСТНОГО ОЖИРЕНИЯ

У СТАРЫХ МЫШЕЙ

М.А. Гавршюв, В.И. Донцов, И.В.Мальцева

Биологически активная добавка к пище - «Трансфер-Фактор», обладающая иммуномодулирующими свойствами, предотвратила возрастное ожирение у группы мышей, под­вергавшихся неограниченному кормлению

ВВЕДЕНИЕ

г Биологически активная добавка «Трансфер-Фактор» (ТФ). производимая компанией "4 ЬгГе Кезеагсп Со" (США) из коровье­го молозива, оказывает иммуномодулирующий эффект, что при­меняется при профилактике различных заболеваний, в том числе у здоровых людей [2-6]. Группа реювенизирующих средств, к которой она относится, имеет свойства, используемые с древних времен для омоложения тканей организма, аналогично пробиоти-кам, получаемым из молодых растительных и животных тканей, таким как проростки зерен пшеницы, например.

В лаборатории геронтологии МГМСУ и Национального ге-ронтологического центра прошло апробирование иммуномоду-лирующих эффектов «Трансфер-Фактора» в эксперименте со ста­рыми мышами [6]. Была обнаружена способность этой биоактив­ной добавки восстанавливать потенциал клеточного роста тканей живого организма. Также в итоге нашего эксперимента, описан­ного далее, было обнаружено свойство «Трансфер-Фактора» уменьшать возрастное ожирение, развивающееся у мышей при их неограниченном кормлении.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТА.

В данном эксперименте нашей лаборатории было использо­вано 30 мышей-самок Ва1Ь/с. восьмимесячного возраста, взятых из питомника «Столбовая». В ходе эксперимента половине под­опытных грызунов в течение 4 месяцев вводили один раз в сутки в физиологическом растворе дозу «Трансфер-Фактор» в соответ­ствии с рекомендуемой для применения человеком - из расчета 1 капсула (весом 200 мг) на 50 кг массы тела.

Свободный рацион, предоставленный подопытным мышам, позволил неограниченно питаться стандартным гранулирован­ным кормом с добавлением овощей, хлеба и молока.

88


РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТА.

Животные из группы контроля в ходе эксперимента четко разделились на 2 прШЙрно равные группы — с ярко выраженным ожирением и без него.

У группы грызунов, которым вводили «Трансфер-Фактор», не было отмечено признаков выраженного ожирения - все живот­ные ищш примерно одинаковую массу тела (рис. 1). _

Рис. 1. Стабильность веса у старых мышей, получавших:,трансфер

фактор на фоне неограниченного питания.                         <|Г

По оси абсцисс - номер мыши По оси ординат - масса мышеи в гр.

Типичное различие внешнего вида животных, которым вво­дили «Трансфер-Фактор» по сравнению с группой контроля, а также с молодыми животным, показано на рис. 2. Из фотографии видно, что введение БАД предотвращает ожирение старых жи­вотных.

Таким образом, эффект «Трансфер-Фактора» предотвращать развитие возрастного ожирения показан на примере мышей вось­мимесячного возраста.

Эффекты ТФ  могут иметь  в  своем механизме различные

ВЛИЯНИЯ.                                                                                                          !,

89

Рис. 2. Эффект «Трансфер-Фактора» при развитии возрастного ожирения у мышей (фото). Сверху вниз: старая мышь; старая мышь, которой вводили «Трансфер-Фактор»; молодая мышь.

В геронтологии научно обосновано, что с возрастом происхо­дят значительные изменения обмена веществ а также развивает­ся дистрофия паренхиматозных тканей, которые замещаются на соединительную ткань (при возрастной дистрофии и склерозе тканей) и на жировую ткань (при возрастном ожирении).

Согласно иммунной теорий старения центральный механизм старения самообновляющихся тканей связан со снижением кле­точного самообновления (снижением потенциала клеточного роста). Возможность влияния на старение тканей посредством влияния на процесс клеточного роста связана с известной в оте­чественной геронтологии теорией регуляции процессов роста со­матических тканей Т-лимфоцитами, впервые апробированной на моделях травматической регенерации ряда органов [1].

90


Иммунная теория старения, подтверждаемая в лаборатории Института системного анализа РАН и Национального геронтоло-гического центра,^обусловлена наличием субпопуляций Т-лимфоцитов, специфически влияющих на клеточное деление со­матических клеток, что с истощением этой функции с возрастом имеет, по нашему мнению, регуляторный характер [2-4].

Данная гипотеза и ее научная апробация позволяют исполь­зовать различные иммунотропные средства для омоложения тка­ней, а именно для восстановления клеточного потенциала роста тканей до уровня их высокого самообновления, как правило, рез­ко уменьшающегося с возрастом.

В предыдущих материалах о работе нашей лаборатории было рассказано о способности «Трансфер-Фактора» восстанавливать снижаемый с возрастом потенциал клеточного роста тканей [10], что дает право говорить о вероятном влиянии этой биологически активной добавки на другие геронтологические характеристики живых существ. Например, эта БАД влияет на биологический возраст, оцениваемый у человека по целому ряду параметров [6].

Приведенные выше результаты эксперимента указывают на возможность предотвращения развития возрастного ожирения у мышей при введении «Трансфер-Фактора».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

БАД нового поколения - «Трансфер-Фактор», получаемая из молозива коров, способна не только положительно влиять на иммунные процессы, снижать показатели биологического возрас­та, восстанавливать ростовой потенциал тканей, но и оказывать воздействие на другие признаки старения, в том числе на разви­вающееся с возрастом ожирение [11].

Данные свойства этой биоактивной добавки к пище открыва­ют перспективы ее использования в "Медицине Антистарения", а также в профилактике нормальных и патологических процессов, обусловленных возрастом.

Интересной представляется возможность применения БАД «Трансфер-Фактора» для коррекции ожирения различной этиоло­гии.

91

ЛИТЕРАТУРА

  1. Бабаева А.Г. Прошлое, настоящее и будущее проблемы
    лимфоидной регуляции нелимфоидных клеток // Бюлл. экспер.
    биологии и мед. 1995. №9. С. 230-234.
  2. Донцов В.И. Регуляция лимфоцитами клеточной пролифе­
    рации - альтернатива теории "противоопухолевого надзора?". //
    Иммунология. 1989. N.5.  С. 94-96.
  3. Донцов В.И. Иммунобиология постнатального развития -
    М.: Наука. 1990. 152с.

 

  1. Донцов В.И., Крутько В.Н., Подколзин А.А. Фундамен­
    тальные механизмы геропрофилактики.   М.: Биоинформсервис
    2002.   464с.                           '                                         "
  2. Иммунореабилитация при инфекционно-воспалительных и
    соматических заболеваниях с использованием трансфер факто­
    ров. Методическое письмо МЗ РФ.   2004.
  3. Санталова В.А., Донцов В.И., Крутько В.Н., Чижов А.Я.
    Экспериментальная оценка Трансфер-фактора у старых мышей.
    Сборник научи, трудов «Актуальные проблемы экологии и при­
    родопользования. 2007. М. :Рудн. Вып.9. часть 3. С.202-206.
  4. Суханов Б.П. Трансфер Факторы, как элемент питания че­
    ловека. // В сб. науч. -практ. конф. с международным участием:
    Иммунореабилитация при инфекционно-воспалительных заболе­
    ваниях. Барнаул. 29 ноября 2003. С. 27-28.
  5. Хеннен У.Дж.   Трансфер фактор Плюс: идеальная комби­
    нация биологически активных веществ для оптимального имму­
    нитета (под ред. К). П. Гичева и Э.А. Огановой). Новосибирск
    2001. 73 с.                                                             '

9.  СЫхоу А.У., 8ап1а1оуа У.А., Кш&о У.К., ВоШзоу У.1. ОЫ
е ёгоМЬ ро1еппа1 гезЫайоп Ьу птшшпе тосЫаЬг - п-апзтег-

гасгог (ТР). VI Еигореап Соп§гезз оГ 1АОО. Му 5-8. 2007. 8аш1: Ре1егзЬиг§. - Кизз1а. Тез. Межд. Конф. //Успехи геронтологии. Вып. 20. №3. Р. 28.

10. Науугепсе Н. 8., Вогко\узку XV. 'Ггапзгег РасЫ сиггепг, зтдйш
апо! Гишге рго§рес15 // ВюШегару. 1996. Уо1.9. Р. 1-3.

1Ь Донцов В.И., Чернилевский В.Е., Кудашов А.А., Гаврилов М.А. Способ профилактики возрастного ожирения. Заявка Рег № 2009112571 Заявка, Рег. № 2009112571.


ВИРТУАЛЬНЫЕ ПРИБОРЫ ДЛЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

В.И.Донцов, МЛТаврилов

Создан новый класс приборов для ввода информации в компьютер на основе работы со звуковой картой компьюте­ра и дешевого современного интерфейса, позволяющего ра­ботать с современными датчиками и реализовывать практи­чески неограниченное количество специализированных и общих виртуальных приборов.

ВВЕДЕНИЕ

Основой научных исследований на животных в условиях ш у1уо является наличие современной аппаратной базы. Между тем, во всем мире есть лишь единичные фирмы, выпускающие спе­циализированное оборудование для исследований на животных, которое зачастую недоступно по ценам и не соответствует по­требностям исследователей. В России практически не выпускает­ся специализированного дешевого и разнообразного оборудова­ния медико-биологического профиля. Научные работники, как и Высшая школа остро нуждается в современном учебном и учеб­но-исследовательском оборудовании, которое должно отвечать ряду современных требований. Оно должно быть:

•    современным, дешевым и компактным,

" предоставляющим возможности создания удобного и аде­кватного задачам обучения интерфейса,

  • обеспечивающим    активные    формы    образовательного
    процесса и имитационные режимы работы, удобные для дистант­
    ных режимов обучения,
  • иметь модульностью, полифункциональностью и легкой
    перестраиваемостью под конкретные задачи    образовательного
    процесса и НИР,
  • иметь большие возможности регистрации, компьютерной
    обработки и анализа сигналов.

Все эти возможности могут быть реализованы с помощью созданного семейства новых аппаратно-программных комплек­сов - «виртуальные приборы» (ВП), которые идеапьно подходят для обеспечения лабораторных практикумов и научно-исследовательской работы студентов и преподавателей, а также являются идеальными для научных работ с животными.

 

92


93

ОСОБЕННОСТИ И ПРЕИМУЩЕСТВА ВП

Виртуальные приборы - это аппаратно программные ком­плексы, реализующие или имитирующие функции реальных при­боров. Они основаны на широком и глубоком использовании всех возможностей, даваемых современными компьютерами в плане -генерации, регистрации и обработки внешних сигналов, а также на использовании широкого круга современных датчиков - де­шевых и высоко чувствительных [2-4]. Преимуществами ВП являются:

использование современных высоких технологий в учеб­но-преподавательском процессе;

замена дорогостоящего оборудования на не уступающие им классом, а часто превосходящие по широте возможностей ВП; расширенные возможности по сравнению со стандартной аппаратурой (вывод данных в файл, печать результатов, обработ­ка данных стандартными программами типа ЕхсеП и пр.);

возможность самостоятельного написания программ и их оперативной редакции с использованием простого графического языка программирования, типа ЬаЪУ1е\у, доступного для неспе­циалистов в области программирования;

возможность использования стандартных возможностей компьютера для генерации и ввода сигналов, в том числе звуко­вой платы, что позволяет обходить дорогостоящие и специализи­рованные приборы сопряжения внешних сигналов и компьютера и их специализированные программы, зачастую не поддающиеся настраиванию в соответствии с запросами пользователя;

возможность широкого использования возможностей компьютера для обработки сигналов, для их наглядного отобра­жения и ведения баз данных;

возможность создавать удобный и адекватный задачам работы интерфейс;

возможность создания универсальных программ регист­рации сигналов и обработки данных с широкими возможностями настройки параметров;

возможность использования широкого круга современ­ных датчиков - дешевых и высоко чувствительных;

возможность создания имитационных режимов работы, создания баз данных для учебно-преподавательского процесса;

возможность отображения на широком экране непосред­ственной работы с ВП в ходе учебных экспериментальных работ.

94


НОВЫЙ ТИП ПЕРИФЕРИИ

Нами [1] создан новый класс приборов для ввода информации в компьютер на оснбвё работы со звуковой картой компьютера и дешевого современного интерфейса, позволяющего работать с современными датчиками и реализовывать практически неогра­ниченное количество специализированных и общих виртуальных приборов - Устройства Ввода Информации в Компьютер (УВИК).

Ввод сигналов может быть реализован непосредственно или через преобразователь напряжение-частота (ПНЧ). Кроме прямо­го введения частотного сигнала в пределах 20 Гц-20кГц и напря­жением порядка 10 мВ 10 В, естественного для звуковой платы, возможно прямое введение сигналов от резисторных датчиков, например, терморезисторов или фоторезисторов. Это достигается генерацией звуковой платой сигнала питания порядка 200-2000 Гц, пропускаемого через резистороный датчик, с последующим анализом амплитуды сигнала, поступающего на вход звуковой платы. Этот простой метод не требует фактически никакой пери­ферии и позволяет достаточно точно измерять колебания сопро­тивления резистора пропроционально отражающегося на ампли­туде проходящего через резисторный датчик тока питания.

В случае, если имеются датчики дающие сигнал гальваниче­ского типа (например, гальванодатчик кислорода), сигнал можно преобразовать используя дешевые и точные ЧИПы - преобразо­ватели напряжения в частоту, дающие в наших исследованиях возможность замерять напряжения 10 мкВ-10 В со стабильно­стью - значение частоты до 6-7 знаков (!), приборы такого класса стоят десятки тысяч долларов, тогда как приведенная схема стоит десятки рублей!

Принятый сигнал можно обработать используя стандартную среду ЬаЬУ1е\у. Это простая «псевдоиюкенерная» среда програм­мирования, с использованием графической системы программи­рования, отличается легкостью и наглядностью и приспособлена для работы с сигналами самого разного типа. Принятые сигналы можно преобразовывать в удобную форму, создавая таким обра­зом полноценные виртуальные приборы самого разного типа, не отличающиеся, а часто превосходящие дорогие стационарные приборы.

Возможность быстрого маневра с датчиками и типом про­граммной обработки сигнала делает данные ВП незаменимыми для исследовательских работ с животными.

95


 

 

НЕКОТОРЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ СЕМЕЙСТВА ВП

Разработанные нами ВП и программы сопровождения пред­назначены для воспроизводства, записи и отображения формы, частоты и амплитуды аналогового сигнала с использованием зву­ковой платы компьютера (1-1000 мВ, 20-20000 Гц), что позволяет регистрировать сигналы с различных периферических устройств, подключая их к 1лпе 1п звуковой карты компьютера, а также ис­пользовать выход звуковой платы для сформированных сигналов. Программы могут использоваться для работы с самыми различ­ными внешними датчиками - в биомедицинских, а также техни­ческих лабораториях и идеально подходят для лабораторных ра­бот в ВУЗах биологического, медицинского и иного профиля.

Комплекс включает: 1- и 2-канальные самописцы, Х-У плот­тер, генератор сигналов произвольной формы, осциллоскоп, кон­троль сигнала с регистрацией выхода за заданные пределы, моде­лирование процесса по формуле и некоторые другие.

Примеры использования: генерация сигналов произвольной формы для внешних устройств, регистрация внешних сигналов в режиме осциллоскопа, регистрация сигнала любых внешних при­боров имеющих аналоговый выход (например - спектрофотомет­ра, хроматографа, мулътиметра и пр.), регистрация одновременно 2-х параметров по 2-м каналам от 2-х аппаратов с аналоговым выходом сигнала, регистрация отношения сигналов - Х-У плот­тер и пр., а также моделирование процессов по произвольной формуле и пр.

ПРИМЕР ВП

На рисунке 1 приведена лицевая панель программа ВП «Пульсомет» с показанной регистрацией пульса мыши. Пульс регистрировался на хвосте мыши с использованием ИК-датчика и ИК-излучателя (снятых со старой компьютерной мыши).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представленные в работе результаты создания нового класса приборов для введения информации в компьютер и создания на их основе виртулаьных приборов могут быть с успехом исполь­зованы при решении таких актуальных задач нацпроекта «Обра­зование», как "Стимулирование применения в образовательном процессе новых, в т. ч. информационных, образовательных тех­нологий...»

96


Виртуальные приборы имеют исключительно широкий спектр применений и^ при их активном внедрении могут сущест­венным образом у'л'учшить картину инновационного образова­тельного пространства ВУЗов России.


Виртуальные приборы являются идеальными для научных работ с животными и отвечают самым современным требовани­ям.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Донцов В.И., Крутько В.Н., Чернилевский В.Е. Способ
    введения информации в компьютер от резисториых датчиков.
    2007 г. Патент на изобретение. Рег. № 2007125210.
  2. Донцов В.И., Крутько В.Н., Кудашов А.А. Виртуальные
    приборы в биологии и медицине. М. :1Ж88. 2009. 240 с.
  3. Загудиллин Р.Ш. ЬаЬУ1Е\У в исследованиях и разработ­
    ках. М. :Телеком. 2005. 352 с.
  4. Тревис    Д.    ЬаЬУШШ    для    всех.    Пер.    с    англ.    М.
    :ПриборКомплект. 2005. 544 с.

97

КЛИНИЧЕСКАЯ ГЕРОНТОЛОГИЯ

КОМПЬЮТЕРНЫЕ СИСТЕМЫ В ДИАГНОСТИКЕ И ПРОФИЛАКТИКЕ СТАРЕНИЯ

В.И.Донцов, МЛ.Гаврилов, И.В.Мальцева

КОМПЛЕКС ПРОГРАММ ДЛЯ КЛИНИК «Ап11-А§еш§ МеШсше»

Важным перспективным направлением применения совре­менной информатики в решении практических задач профилак­тической медицины является создание компьютерных систем для поддержки и обеспечения процессов оценки и формирования здоровья, диагностики и профилактики старения. В Лаборатории медицинской информатики ИСА РАН, совместно с Националь­ным геронтологическим центром и Лабораторией Геронтологии НИМСИ МГМСУ разработан комплекс компьютерных систем, позволяющий эффективно решать как задачи диагностики и про­филактики изменений здоровья человека, так и задачи диагности­ки и профилактики старения. Эти системы охватывают все сто­роны проблемы диагностики и профилактики старения и выбора оптимальных схем геропрофилактики и биоактивации, что можно видеть на следующей блок-схеме (таблица 1). Ч,

СФЕРА ПРИМЕНЕНИЯ КОМПЬЮТЕРНЫХ СИСТЕМ

Геронтология и гериатрия (контроль индивидуальных осо­бенностей старения и эффективности применения специальных средств профилактики старения (геропротекторов); возрастная физиология (исследования механизмов старения); медицинские центры, центры здоровья, санаторно-курортная сеть и др. формы медико-профилактических учреждений, ставящих задачи реаль­ного повышения трудоспособности, омоложения и продления активной жизни человека; система до- и последипломного обуче­ния специалистов профилактической медицины; социально-гигиенический мониторинг (анализ особенностей старения в группах риска, оценка эффективности медико-профилактических мероприятий).

Ряд систем предназначены для санитарно-гигиенического просвещения и могут быть полезны для всего населения России.

98


Таблица 1

Семейство компьютерных программ для решения задач

диагностики и профж!актики старения

 

 

ЗАДАЧИ

ПРОГРАММЫ

Обучение общим вопросам геронтологии

Учебная программа «А§е»

Моделирование процесса старения и его механизмов

«Моделирование процессов ста- 1 рения»

Вычисление популяционньгх показателей старения (форму­ла Гомперца-Мейкему)

Диагностика индивидуального старения

«Диагностика биовозраста»

Выбор схем геропрофилакти­ки и биоактивации

«Диагностика   и   профилактика старения»

Оценка и подбор оптимально­го физического режима

«Физическое здоровье»

Оценка и подбор оптимально­го пищевого режима

«Питание для здоровья и долго­летия»

Оценка психической работо­способности

«Система определения психиче­ской работоспособности»

Оценка и профилактика стрес­са

«Стресс-Плюс» и «Антистресс»

Оценка и коррекция биорит­мов

«Биоритимы    и    гальваноэлек-троакунунктура»

Санитарно-гигиеническое просвещение

Комплекс программ: «Корректор здоровья», «Диеты для всех», «Травы для всех», «Гомеопатия для всех», «Физическое здоровье», «Тестирование уровня стресса»

Аппаратно-программные ком­плексы.

Комплексы: «Биометрия», «Биолаборатория», «Сигналы     в     биомедицине», «Аудиметр»,     «Кардиоинтерва-лография», «Спирометр».

99

ПРИМЕР КОМПЬЮТЕРНЫХ СИСТЕМ           / ,    М,Л   -г

ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКИХ ВРАЧЕЙ

Электронный учебник «Геронтология и геропрофилактика»

Мультимедийная учебная программа по различным аспектам проблемы старения, диагностике и профилактике старения и био­активации функций. Это единственный отечественный электрон­ный учебник, полноценно освещающий все стороны процесса старения, рассматривающий его причины и общие механизмы проявления. Приводятся как краткие, так и подробные материалы по анатомии, физиологии, биохимии старения. Рассматриваются подходы к оценке старения популяций и количественного вычис­ления индивидуального старения.

Рисунок 1. Компьютерная система - Электронный учебник

Приводятся различные алгоритмы диагностических и геро-профилактических процедур, тактика геропрофилактики и биоак­тивации. Рассматриваются общие и частные механизмы старения, впервые в программу введены понятия Синдромов старения, ко­торые позволяют оценивать старения с точки зрения патофизио­логически связанных комплексных процессов.

100


Введение понятия синдромов старения резко упрощает пони­мание происходящих при старении процессов, позволяет в баллах оценить их выражеййость и целенаправленно подойти к выбору воздействий.

Приводится целый ряд справочных, методических и инфор­мационных материалов, презентации ряда компьютерных про­грамм используемых для диагностики и профилактики старения и биоактивации снижающихся с возрастом функций.

Компьютерная система «Питание для здоровья и долголетия»

С точки зрения концепции рационального питания каждый человек нуждается в определенных количествах различных пи­щевых веществ для удовлетворения энергетических, пластиче­ских и других потребностей организма, различных в зависимости от роста, веса, возраста, пола, физической нагрузки определены.

Обычный пищевой рацион, даже при условии его соответст­вия установленным нормам, не обеспечивает человека необходи­мыми количествами витаминов и минеральных элементов. Кро­ме того, для здоровья человека стала чрезвычайно важна не толь­ко полноценность питания, но и его профилактическая, оздорав-ливающая, детоксицирующая и геропротекторная функции. Это в большой степени определяет современные требования к структу­ре рационального питания. Удовлетворить всем этим требовани­ям практически невозможно, используя привычные подходы к формированию пищевых рационов. Помочь в решении вышена­званных проблем может компьютерная система "Питание для здоровья и долголетия".

Система является эффективным инструментом помощи дие­тологу в решении следующих важных задач:

  • оценка фактического питания;
  • построение индивидуальной нормы питания, на основе ин­
    формации о физиологических   параметрах, физической и психо­
    логической нагрузке,  наличии или риске хронических заболева­
    ний, экологических условиях, привычках и образе жизни:
  • осуществление   автоматизированного    построения    опти­
    мальных лечебных, оздоровительных, профилактических и геро-
    протекторных рационов, соответствующих индивидуальной нор­
    ме и учитывающих финансовые возможности и предпочтения
    клиента;
  • дача рекомендаций по изменению веса, по применению
    БАДов и др. средств коррекции дефицитов рациона;

101

  • справочный материал по содержанию более 30 нутриентов
    в продуктах питания;
  • популярные стандартные рационы и рационы для похуде­
    ния;
  • разнообразная информация по диетам, старению и биоакти­
    вации функций.

Рисунок 1. Компьютерная система «Питание»

Компьютерная система "Диагностика и профилактика ста­рения" (Биологический возраст)

Количественная оценка процесса старения (диагностика ста­рения) является необходимым этапом для разработки мер воздей­ствия на процесс старения и должна отражать разносторонность и разновременность старения различных органов и систем, особен­ности старения конкретного человека.

Компьютерная система является основной для оценки типа, темпа и профиля старения организма и его органов и систем.

102


Компьютерная система "Диагностика и профилактика старе­ния" представляет со^ей экспертную систему помощи по диагно­стике старения методом вычисления биологического возраста организма в целом и отдельных его систем, что дает возможность определения профиля старения и выбора на этой основе с помо­щью средств системы индивидуальной схемы профилактики ста­рения.

Рисунок 3. Компьютерная система «Биовозраст».

Основные функции системы:

- Комплексная диагностика процесса старения с вычислением показателей - Биологического возраста организма в целом, Пар­циальных возрастом для важнейших органов и систем, Выбор дополнительных биохимических и физиологическим показате­лей. Таблица соответствия измеренных показателей функций ор­ганизма статистическим нормам, График парциальных возрастов органов и систем, Текстовое заключение с возможностью вывода подробного описания примененных гестов; Возможность созда­ния собственных наборов и формул определения Биовозраста;

103

-   Возможность использования встроенных тестов и виртуаль­
ных приборов, в том числе заменяющих аппаратные исследова­
ния дорогостоящими приборами;

-   Осуществление поддержки процесса индивидуального вы­
бора и применения системы средств и мер сдерживания старения,
омоложения и биоактивации на индивидуальном и популяцион-
ном уровнях в соответствии с профилем старения, привычками,
факторами риска и наличия хронических заболеваний, финансо­
выми возможностями и др. индивидуальными характеристиками
клиента.

-   Обеспечение врача обширной информацией о механизмах
старения и средствах его сдерживания, включающей медицин­
ские протоколы  профилактики для отдельных процессов старе­
ния и хронических заболеваний.

Для обеспечения этих функций в систему включены базы данных по характеристикам применяемых средств и методов, ме­тодические рекомендации и необходимые справочные материа­лы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработанный комплекс компьютерных систем охватывают все основные стороны проблемы диагностики и профилактики старения и выбора оптимальных схем геропрофилактики и био­активации, являясь важным инструментом для клиник «Ап1> А§еш§ МеЛсше», медицинских центров, центров здоровья, сана­торно-курортной сети и др. форм медико-профилактических уч­реждений, ставящих задачи реального повышения трудоспособ­ности, омоложения и продления активной жизни человека; а так­же для систем до- и последипломного обучения специалистов профилактической медицины; социально-гигиенического мони­торинга (анализ особенностей старения в группах риска, оценка эффективности медико-профилактических мероприятий) и пр.

ЛИТЕРАТУРА

1. «Диета (Профессиональная программа оценки и коррек- :
ции питания». Свидетельство РОСПАТЕНТА. Рег. ; ,
№2008613024 от 24 июня 2008 г.                                        -,«

-   2.   «Диагностика старения. Биовозраст». Свидетельство -с-.-,.    РОСПАТЕНТА. Рег. №2007614122 от 5 июля 2007 г.    ..-.:•.


ДИАГНОСТИКА СТАРЕНИЯ ЧЕЛОВЕКА В.Н.Крутъко, В.И. Донцов, МЛ.Гаврилов

Для детальной характеристики индивидуального старе­ния у человека предлагается использовать определение пар­циальных биологических возрастов, отражающих старение различных систем организма, что позволяет сделать заклю­чение о преимущественном типе и профиле старения, а так­же ряд показателей, отражающих функциональные возмож­ности, психологические, вклад патологических процессов в биовозраст, а также необходимо указывать объем сохранен­ных адаптационных резервов в физическом и нервно-психическом плане. Интерес представляет также выделе­ние факторов риска (ФР) и факторов долголетия (ФД), для чего следует учитывать семейный анамнез (наследственные факторы) и собственный анамнез (приобретенные факторы).

ВВЕДЕНИЕ

Резкое постарение населения и развитие хронических заболе­ваний с возрастом приводит ко все большему вложению средств в программы лечения старых лиц и увеличению объема выплат пенсионного и социального обеспечения без ощутимой отдачи обществу результатов такого использования материальных ре­сурсов. Эти траты сейчас составляют четверть федерального бюджета США, Несомненно, сходные траты вынуждена будет осуществлять и Россия, в которой, в связи с резким падением ро­ждаемости и экономическим спадом, последствия постарения населения представляются вдвойне катастрофичными и являются "проблемой популяционной безопасности", напрямую связанной с возможностями сохранения трудового и оборонного потенциала страны [1,4-11 ].

Формирующуюся новая дисциплина - «Апт1-А§ет§ Месисше» («Медицина антистарения» или «Профилактика старе­ния») предлагает принципиально новые подходы и современные высокие технологии для повышения качества жизни людей при снижении реальных темпов старения и увеличении продолжи­тельности активной трудоспособной жизни.

Одной из центральных проблем здесь является разработка точных количественных методов диагностики процессов, связан­ных со старением и процессов старения как такового.

 

104


105

В наиболее общем виде ясно, что научная современная коли­чественная диагностика старения должна строиться на фундамен­тальных механизмах старения и отражать индивидуальные осо­бенности старения в каждом отдельном случае.

СУЩНОСТЬ, ПРИЧИНЫ, МЕХАНИЗМЫ СТАРЕНИЯ

В наиболее общем фундаментальном виде определение ста­рения как глобального явления известно давно - необходимым и достаточным для сущностного определения старения является его определение как «возрастного снижения жизнеспособности» (сравните со «снижением жизненной силы» или «энтелехии» древних), что эквивалентно снижению упорядоченности структу­ры и работы организма, т.е. повышению процессов хаоса.

Общая фундаментальная причина снижения упорядоченности любых систем в мире, что эквивалентно увеличению степени хаоса (повышению энтропии) известна и определяется одним из фундаментальных законов природы - вторым законом термоди­намики, указывающим на неизбежность накопления хаоса в лю­бой частично открытой ограниченной от внешней среды системе со временем. Поэтому можно считать, что известна и общая при­чина старения. Этой причиной является дискретность форм су­ществования современных организмов на Земле - принципиаль­ная ограниченность от внешней среды как форма существования организмов [1, 4, 6, 7, 13].

Общая причина старения проявляется конкретным образом в конкретных условиях, при этом количество конкретных меха­низмов старения должно быть, что реально и наблюдается, прак­тически бесконечно, ограничиваясь только известными формами строения живых существ. Однако, в целом, системный анализ позволяет выделить некоторые типичные механизмы - главные общие типы старения, к которым могут быть сведены частные механизмы старческих явлений.

Нами предлагается выделять 4 типа - общих направлений процесса старения в организме [7, 8, 10, 11]:

а)  "загрязнение" организма со временем как следствие прин­
ципиальной недостаточности открытости любых отграниченных
от среды систем, даже если они самообновляются внутри себя;

б)  принципиальная недостаточность сил отбора для сохране­
ния только "1гужных" структур в пределах данной системы, если
информация для самосохранения имеется только внутри систе­
мы;

106


в)  снижение количества любых необновляющихся структур в
системе, - а для большинства сложных организмов всегда имеют­
ся необновляющиеезГ:'структуры на всех уровнях их организации
(зубы, альвеолы, нефроны, нервные клетки и пр.);

г)  нарушения регуляции, вызванные различными причинами
общего и частного характера, в том числе снижением давления
эволюционного отбора с возрастом (после полового созревания)
на факторы качества и гармоничности систем рефляции и нали­
чием  конечных  программ  развития  (роста,  дифференцировки
тканей, полового развития, иммунитета и т.п.).

ДИАГНОСТИКА СТАРЕНИЯ - УРОВЕНЬ ПОПУЛЯЦИЙ

Первая обоснованная и четкая математическая модель старе­ния была создана около 200 лет тому назад Б.Гомперцом (1825). Она и до сих пор наиболее точно описывает смертность человека и, видимо, большинства других организмов.

Смертность (т), как противоположность жизнеспособности, можно определить соотношением га=Ь/А, где "к"- коэффициент пропорциональности. Тогда повышение вероятности смертности для отдельного организма (или, что то же самое, повышение доли умерших в популяции) во времени будет происходить по экспо­ненте, а логарифм "т" будет меняться по линейному закону, что и наблюдается в действительности.

Таким образом, уравнение Гомперца имеет следующий вид: т(1) = Ко * ехр(а * *), где "т" - смертность, изменяющаяся во времени - "т"; "Ко" - начальный уровень смертности, "а" - коэф­фициент, характеризующий скорость нарастания смертности со временем. Эта формула была впоследствии модифицирована У. Мейкемом, добавившим в формулу Гомперца постоянный коэф­фициент, представляющий независимый от возраста компонент смертности, имеющий, как теперь становится ясно, эколого-социальную природу и выражено меняющийся в истории челове­чества: т (1) = А + Ко * ехр (а * *).

Таким образом, для целей количественной геронтологии не­обходимо иметь возможность вычисления параметров уравнения Гомперца-Мейкема, что можно сделать также методами нели­нейной регрессии. Для вычисления Гаврилов, Гаврилова [5] предлагают определенный алгоритм, дающий вполне удовлетво­рительную точность.

107

ДИАГНОСТИКА ИНДИВИДУАЛЬНОГО СТАРЕНИЯ (БВ)

Биологический возраст (БВ) - это характеристика любого ме­няющегося с возрастом процесса или биомаркера, но есть классы или группы этих процессов и элементов, отличающиеся специ­фикой и поэтому имеющие свои специальные названия: Кален­дарный возраст (КВ) - отражает старение организма и его систем в среднем для популяции, дает стандартные средние вероятности смерти и ожидаемой продолжительности жизни (ОПЖ); Функ­циональный возраст (ФВ) - отражает возрастную динамику фи­зиологических функций и функциональных резервов, он может заметно уменьшаться в результате тренировки; Патологический возраст (ГТВ) - это отражение интенсивности болезней и предбо-лезней, влияющих на ОПЖ; Психологический возраст (ПсВ) -показатели, характеризующие возрастные изменения психики [7, 8, 10-13]. В дополнение к показателям биовозраста для прогноза витальной траектории (прогноза ОПЖ и зависящего от возраста уровня здоровья) необходимо определять также факторы риска (ФР) - наследственные и приобретенные; и факторы долголетия (ФД) - генетические и внешнесредовые факторы.

Профиль старения определяется по соотношению темпов ста­рения различных органов и систем, стареющих неравномерно. Обычно описывают профиль старения по показателям сердечно­сосудистой, дыхательной, мышечной, нервно-психической и ана­лизаторной систем. Стандартами для количественной характери­стики старения являются средние для человека темпы старения различных органов и систем.

Для определения биологического возраста человека различ­ными группами отечественных и зарубежных исследователей предложены различные наборы тестов [2, 3, 8, 10-12, 14, 15-20]:

  1. Показатели внешних проявлений старения: поседение во­
    лос (баллы); облысение (баллы);
  2. Морфологические показатели: вес; рост; рост сидя; ширина
    носа; длина уха; ширина плеч; толщина живота; толщина складки
    кожи (плечо).

3.  Физиологические функции в покое: аудиометрия - верхняя
частотная граница слышимости (кГц); аудиометрия - порог слы­
шимости дБ) на частоте обычно 4 кГц; острота зрения; рас­
стояние ближней точки зрения; сила кисти доминирующей руки;
ЧСС в покое; систолическое, пульсовое и диастолическое артери­
альное давление; давление кислорода артериальное; ЖЕЛ и др.

108


  1. Психологические и нервно-психические показатели: стати­
    ческая балансировка на левой ноге (сек); тест распознавания кар­
    тинок; категориальный* картиночный тест (время и число оши­
    бок); символьный тест Векслера; тест на концентрацию внимания
    по Вошчюп; тест на скорость движения пальцев (скорость закра­
    шивания 10 кружков); время реакции выбора (из 4 рисунков);
    точность рук (№ кружка из суживающегося ряда с точным попа­
    данием); тест постукивания; световая экстинкция (сек); коорди­
    национная проба рука-глаз; цветовой тест; тест на концентрацию
    внимания Ландольта; тест концентрации внимания в лабиринт­
    ном тесте; время звуковой реакции (мсек); время световой реак­
    ции (мсек); вибрационная чувствительность.
  2. Нагрузочные тесты: максимальная эргометрия (ватг); ско­
    рость выполнения физических упражнений; ЧД при физической
    нагрузке; ЧСС (через 30 сек, 1, 2, 3, 4 мин после физических уп­
    ражнений); отношение ЧСС при стандартных нагрузках к ЧСС в
    покое; максимальное систолическое давление (при физических
    упражнениях); максимальное поглощение кислорода (при велоэр-
    гометрии); форсированный экспираторный объем; форсирован­
    ная ЖЕЛ; экскреция фенолсульфонфталеина за 15 мин; клиренс
    креатинина; темновая адаптация (сек); сахарная нагрузка; ско­
    рость кислородного обмена.
  3. Биохимические и клинические показатели: число эритро­
    цитов и гемоглобин; СОЭ; общий белок; азот мочевины крови;
    щелочная фосфатаза крови; холестерол крови; кальций крови;

 

-  альбумин крови; глуПВК-трансаминаза; соотношение аль­
бумин/глобулин крови; глутОксалацетат трансферраза; фибрино­
ген крови; триглицериды крови; фосфолипиды крови;

-  креатинин крови; мочевая кислота крови; кариесный зубной
индекс.

Все перечисленные показатели практически в произвольных сочетаниях используются теми или иными школами по определе­нию БВ. Число используемых показателей также значительно варьирует от 37 для Лейпцигского Университета до 3 в некото­рых тестах Финляндского Университета 1ууазку1а. Не удается однозначно ответить на вопрос, какое же число показателей оп­тимально для определения БВ. Ясно, однако, что увеличение числа показателей более 10-15 мало что дает в отношении точно­сти определения БВ, небольшое же число показателей БВ (3-4) не позволяет дифференцировать типы и профиль старения.

109

Оптимальным, видимо, является набор из наиболее отли­чающихся тестов, охватывающих различные системы и органы и отражающих:

-  возрастную физиологию;

-  возрастную хроническую патологию;

-  пределы адаптации и функциональные резервы;

-  физическую и умственную работоспособность;

-  характеристики постарения важных систем организма;

-  самооценку состояния здоровья, физического и психическо­
го самочувствия.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОВОЗРАСТА МЕТОДОМ МНОЖЕСТВЕННОЙ РЕГРЕССИИ

При использовании различных тестов определения БВ для каждого обследуемого регистрируется некоторый набор количе­ственных показателей М1, М2, ..., Мп - так называемых маркеров старения. Полученные данные можно анализировать двумя спо­собами - либо строить профиль старения, характеризующий уро­вень износа отдельных структурных элементов или функций ор­ганизма, или же строить комплексный показатель старения. В последнем случае БВ должен быть представлен в виде некоторой функции маркеров. Наиболее простой и распространенной фор­мой такого представления является линейная регрессионная за­висимость:

БВ = А + В1*М1 + В2 * М2 + ... + Вп * Мп     (формула 1), -где А, В1, В2 ,.., Вп - постоянные коэффициенты. Полученное выражение для КВрегр отождествляют с БВ (т.е. полагают БВ = КВ регрессионное). Качество полученной аппрок­симации оценивают по величине коэффициента корреляции т ме­жду двумя выборками - набором реальных значений КВ для ре­ферентной популяции и набором расчетных значений БВ. Квад­рат коэффициента корреляции (Г), значение которого обычно приводят в процентах, называется коэффициентом множествен­ной детерминации. Эта величина показывает, какую часть вариа­ции БВ можно объяснить за счет представления БВ в виде функ­ции от набора маркеров. В целях компенсации математически обнаруживаемого смещения вводится понятие должного биоло­гического возраста (ДБ В), который определяется в виде линейной функции от КВ:   ДБВ = а + Ъ * КВ (формула 2), где коэффициен­ты а и Ь определяются путем линейной регрессии БВ на КВ. При этом Ь = г2.

110


В настоящее время разработано огромное количество методов определения БВ с помощью моделей множественной линейной регрессии. \У\Веап $Р8], в частности, отмечает, что в геронтоло-гической литературе крайне редко встречаются работы, в кото­рых сопоставляются результаты применения разных методов оп­ределения БВ для одной и той же популяции или же одного и то­го же метода - для разных популяций. Кроме того, характерным недостатком большинства известных регрессионных моделей БВ является отсутствие сведений о статистической достоверности коэффициентов, входящих в формулы БВ. В России до настояще­го времени наиболее широко использовалась разработанная в Институте геронтологии АМН СССР в Киеве методика опреде­ления БВ [3], включающая следующий набор маркеров: АД с, АДд и АДп - систолическое, диастолическое и пульсовое артери­альное давление (в мм. рт. ст.): Сэ - скорость распространения пульсовой волны по сосудам эластического типа (м/сек) - на уча­стке сонная - бедренная артерии.; См - скорость распространения пульсовой волны по сосудам мышечного типа (м/сек) - на участке сонная - лучевая артерии; ЖЕЛ - жизненная емкость легких (в мл); ЗДвыд. - время задержки дыхания на выдохе; А - аккомода­ция хрусталика (по расстоянию ближней точки зрения, выражен­ная в диоптриях); ОС - острота слуха или слуховой порог при 4000 Гц (в Дб); СБ - статическая балансировка (сек) на левой но­ге: МТ - масса тела (кг); СОЗ - самооценка здоровья (количество неблагоприятных ответов на 29 вопросов стандартной анкеты); ТВ - символьно-цифровой тест Векслера (число правильно за­полненных ячеек за 90 сек). В соответствии с этой методикой, для количественного определения БВ и ДБВ применяются сле­дующие формулы.

Для    мужчин    (формула    3).:    БВ    =    58.873+0.180*АДс-0.073 *АДц-0.141 *АДп-6.262*Сэ+0.646*См-0.001*ЖЕЛ+0.005* ЗДвыд-1.881 *А+0.189*ОС-0.026*СБ-0.107*МТ+0.320*СОЗ-0.327 ТВ.

ДБВ = 6.58+ 0.863 *КВ

Для   женщин   (формула   4).:       БВ   =   16.271+0.280*АДс-
0.193 *АДц-0.105*АДп+0.125*Сэ+1.202*               См-0.003*ЖЕЛ-

0.065*ЗДвыд-0.621*А+0.277*ОС-0.070*СБ+0.207*МТ+0.039*СОЗ-0.152*ТВ.

ДБВ = 12.10 + 0.706 * КВ

Коэффициент детерминации БВ составляет 86.3% для муж­чин и 70.6% для женщин.

111

Нами была оценена эффективность определения БВ с помо­щью методики Института геронтологии (г. Киев) для популяции жителей г. Москвы [14]. Было обследовано 195 практически здо­ровых мужчин и женщин в возрасте от 20 до 74 лет. Результаты расчетов БВ для обследованной популяции москвичей по мето­дике Института геронтологии (г. Киев) оказались существенно хуже, чем для референтной популяции жителей Украины. Коэф­фициенты множественной детерминации для мужчин и женщин по основному варианту методики были равны соответственно 31% и 52%. Для двух упрощенных вариантов методики коэффи­циенты множественной детерминации БВ были еще ниже: 28% и 23% для мужчин и 20% и 17% для женщин, что означает отличие обследованной нами популяции москвичей от референтной киев­ской популяции. На основе полученных данных мы построили новые формулы БВ [14], удовлетворяющие требованиям: мини­мальности числа используемых маркеров, надежности всех вхо­дящих в формулы коэффициентов, учета нелинейного характера возрастной динамики некоторых (формула 5).

Для мужчин: БВ = 23,400 + 5.246 * Сэ - 0,004 * ЖЕЛ - 3,371 * 1п(СБ) + 0.191 * ЗД . ДБВ = 10.1 + 0.762 КВ.

Для женщин: БВ = -21,337 + 4.911 * Сэ - 0,063 * СБ + 0,173 * ОС + 5,512 * 1п(А) , (аккомодация в мм), или:

БВ = 16,740 + 4.911 * Сэ - 0,063 * СБ + 0,173 * ОС - 5,512 * 1п(А), если аккомодация измеряется в диоптриях. ДБВ = 13.35 + 0.691* КВ.

Коэффициенты множественной детерминации составили 76% у мужчин и 69% - у женщин. Все коэффициенты, входящие в формулы, достоверно отличны от 0 с уровнем значимости р<0.01.

При использовании нелинейной регрессии разброс данных вокруг прямой БВ=КВ стал значительно более равномерным для всех возрастов. Для вычисления показателей старения популя­ций, а также индивидуального старения, нами были разработаны специальные компьютерных программы «Моделирование про­цессов старения», «Диагностика и профилактика старения».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Для детальной характеристики индивидуального старения у человека нами предлагается использовать определение парциаль­ных биологических возрастов, ФВ, ПсВ, ПВ, а также адаптаци­онные резервы, факторы риска (ФР) и факторов долголетия (ФД).


ЛИТЕРАТУРА

  1. Анисимов В^У?. Крутько В.Н. //Вестник Российской акаде­
    мии наук. 1996. Т. 66. N6. С.507-51 1.
    1. Белозерова Л.М. //Успехи геронтологии. 1999. Вып.З. С. 143.
    2. Биологический возраст, наследственность и старение. Еже­
      годник «Геронтология и гериатрия» (Под. ред. Чеботарев Д.Ф.).
      Киев, 1984. 178с.
    3. Биология старения. Серия «Руководство по физиологии».
      Академия наук СССР. Л.:Наука.1982" 620 с.
    4. Гаврилов Л. А., Гаврилова Н.С.Биология продолжительно­
      сти жизни.М.:Наука.986.168 с.
      1. Давыдовский И.В. Геронтология. М.: 1966. 320 с.
      2. Донцов В. И., Крутько В.Н., Подколзин А. А. Фундамен­
        тальные механизмы геропрофилактики. М.: Биоинформсервис.
        2001.240с.
        1. Донцов В.И. Труды ИСА РАН. М.:2006. Т.19. С. 94.
        2. Захарова О. Д. Методика статистического анализа смертно­
          сти и продолжительности жизни. М.: ЯСПИ РАН. 1996.

 

  1. Крутько В.Н., Донцов В. И., Сердакова К.Г. Труды ИСА
    РАН. М.:2006. Т.19. С.5.
    1. Крутько В.Н. и др. Труды ИСА РАН. М.:2006. Т.19. С.ЗЗ.
    2. Крутько В.Н., Мамай А.В., Славин М.Б. // Физиология че­
      ловека, 1995. N6. €.42.
      1. Комфорт А. Биология старения. М. Мир. 1967. 398 с.
      2. А.А.Подколзин, В.Н.Крутько, В.И.Донцов и др. Учебно-
        методическое пособие для врачей. М.:2001.
      3. Подколзин А.А., Крутько В.Н., Донцов В.И./У Профилак­
        тика старения. Ежегодник НГЦ. Вып.2. М.: НГЦ. 1999. С. 61.
      4. ВаНп А.К. (Ей.) Ргастлса! НапйЬоок от" Ншпап Вю1о§1са1
        А§е Ое1егтшапоп. Воса Кайш. РЕ: СЯС Ргезз. 1996. 521 р.

17.Ви1р1й С1 Аззеззт§ Ью1о§1са1 а§е: ргастдса] !гу? (Кеу1е\у) // Сегоп*о1оеу.1995. Уо1. 41. Р.315

  1. Оеап \У. (Её.) Вю1о§юа1 аеш§ теазигетеп!. Ьоз Ал§е1ез.
    1988.240р.
  2. МсС1еап О.Е. Вютагкегз ог" а§е апА а§т§ (Кеу1елу)//Ехр.
    Оегото!. 1997. Уо1.32. Р.87.
  3. МоогасНап А.В. Вютагкегз оГ а§т§: <1о \уе кполу \уЬа1 го
    1оок Гог?// 1.Оегоп1о1.1990.Уо1.45.В183.

 

112


ИЗ

Московское общество испытателей природы

Московский государственный университет

им. М.В.Ломоносова

ДОКЛАДЫ

моип

Том 43

Секция Геронтологии

Москва, МОИП, 2010

Представления: 167

Теги: гаврилов, доктор, иммунология

Комментарий

Вы должны быть участником Клуб Доктора Гаврилова, чтобы добавлять комментарии!

Вступить в Клуб Доктора Гаврилова

\ua!-- End Back to top --> \uascript type="text/javascript">\ud var _gaq = _gaq || [];\ud _gaq.push(['_setAccount', 'UA-19350238-4']);\ud _gaq.push(['_trackPageview']);\ud\ud (function() {\ud var ga = document.createElement('script'); ga.type = 'text/javascript'; ga.async = true;\ud ga.src = ('https:' == document.location.protocol ? 'https://ssl' : 'http://www') + '.google-analytics.com/ga.js';\ud var s = document.getElementsByTagName('script')[0]; s.parentNode.insertBefore(ga, s);\ud })();\ud \ua!-- Yandex.Metrika counter --> \uascript type="text/javascript">\ud(function (d, w, c) {\ud (w[c] = w[c] || []).push(function() {\ud try {\ud w.yaCounter18622057 = new Ya.Metrika({id:18622057,\ud webvisor:true,\ud clickmap:true,\ud trackLinks:true,\ud accurateTrackBounce:true});\ud } catch(e) { }\ud });\ud\ud var n = d.getElementsByTagName("script")[0],\ud s = d.createElement("script"),\ud f = function () { n.parentNode.insertBefore(s, n); };\ud s.type = "text/javascript";\ud s.async = true;\ud s.src = (d.location.protocol == "https:" ? "https:" : "http:") + "//mc.yandex.ru/metrika/watch.js";\ud\ud if (w.opera == "[object Opera]") {\ud d.addEventListener("DOMContentLoaded", f, false);\ud } else { f(); }\ud})(document, window, "yandex_metrika_callbacks");\ud \uanoscript>\ua<div><img src="//mc.yandex.ru/watch/18622057" style="position:absolute; left:-9999px;" alt="">\ua/noscript> \ua!-- /Yandex.Metrika counter --> \uascript data-type="native" data-timer="60" data-appkeyid="6f63169f-4a03-4627-9881-af93119184cb" src="//s.appintop.com/widget/appbnr.js" async="1"> \ua!-- Setup file for More Smileys - Add your own custom Smileys --> \uascript type="text/javascript" src="http://shop.doctorgavrilov.ru/club/ZMoreSmileyData.js"> \ua!-- Smileys 6A - from jQueryHelp.ning.com - DO NOT DELETE THIS! --> \uascript type="text/javascript" src="http://shop.doctorgavrilov.ru/club/SmileyTest6A.js"> \ua!-- Scrolling Message to NingBar --> \ua!--\ud
3 января ОТКРЫТИЕ ОНЛАЙН-ШКОЛЫ ДОКТОРА ГАВРИЛОВА! До открытия школы действует 50% скидка!Подробнее здесь...
\ud --> \ua!--\ud\ud
Приглашаем вас на открытый вебинар "Как никогда не уставать" Подробнее здесь...
\ud --> \ua!-- End Scrolling Message to NingBar --> \ua!-- Add Message to Profile Pages --> \uascript type="text/javascript">\udx$(document).ready(function() {\udx$(".xg_widget_profiles_profile_show .xg_2col h1").after('
Есть сложности с освоением сайта? Вам сюда !
Реклама партнеров: Бесплатная омолаживающая процедура!
');\ud});\ud \ua!-- Добавление кнопки в ВКонтакте в группу кнопок Like --> \ua!-- Put this script tag to the of your page --> \uascript type="text/javascript" src="http://userapi.com/js/api/openapi.js?45"> \uascript type="text/javascript">\ud VK.init({apiId: 2717780, onlyWidgets: true});\ud \uascript type="text/javascript" language="javascript">\udx$(".share-links").before("
");\ud \uascript type="text/javascript">\udVK.Widgets.Like("vk_like", {type: "button"});\ud \ua!-- End Добавление кнопки в ВКонтакте в группу кнопок Like --> \ua!-- tynt™ publisher tools --> \uascript type="text/javascript">\udif(document.location.protocol=='http:'){\ud var Tynt=Tynt||[];Tynt.push('d2C_Xmq6Gr4BnYacwqm_6r');Tynt.i={"ap":"Скопировано отсюда:"};\ud (function(){var s=document.createElement('script');s.async="async";s.type="text/javascript";s.src='http://tcr.tynt.com/ti.js';var h=document.getElementsByTagName('script')[0];h.parentNode.insertBefore(s,h);})();\ud}\ud \ua!-- End tynt™ publisher tools --> \ua!-- Похудей онлайн \ud\ud\ud\ud end --> \ua!-- BEGIN banner CODE \ud\ud\ud-- END banner CODE --> \uascript charset="ISO-8859-1" src="http://fast.wistia.com/static/popover-v1.js" type="text/javascript">\ud